Влияние кормовой добавки Reasil Humic Health на скорость элиминиации антибактериального препарата «флорфеникол» из организма цыплят-бройлеров

ДМИТРИЕВ Н.О.
КОЗЛОВ С.В.
САЛАУТИН В.В.
ВАСИЛЬЕВ А.А.

Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова

Введение.

Проблема применения антибиотиков в птицеводстве, с каждым годом, ощущается все острее. Многие ученые бьют тревогу из-за бесконтрольного применения антибиотиков в птицеводстве [1, с. 250], что ведет за собой увеличение устойчивости у бактерий, которая защищает их от воздействия препарата.

Это угрожает здоровью и даже жизни не только птиц, но, в первую очередь, человека [2, с. 84]. Поэтому, в настоящее время, поиск решения данной проблемы является весьма актуальной задачей. Одним из методов решения данного вопроса, являются кормовые добавки, способные заменить, либо ускорить вывод из организма антибактериального препарата [2, с. 87].

В нашем исследовании проведена оценка влияния кормовой добавки Reasil Humic Health, на основе гуминовых кислот, на скорость выведения антибактериального препарата «Флорфеникол».

Кормовая добавка по внешнему виду порошок коричневого цвета, которая применяется для повышения продуктивности животных, птиц и рыб. Обладает высокой биодоступностью и эффективностью использования, иммуномодулирующими и гепатопротекторными свойствами, нейтрализует мико- и эндотоксины.

Флорфеникол 10% раствор для орального применения [4, с. 198] относится к антибактериальным лекарственным препаратам из группы фениколов. Флорфеникол, входящий в состав препарата, является производным тиамфеникола, в молекуле которого гидроксильная группа заменена атомом фтора.

Обладает широким спектром бактериостатического действия, активен в отношении Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida, Pasteurella haemolytica, Bordetella bronchiseptica, Haemophilus spp., Micoplasma hyopneumoniae, Micopiasma hyorhinis, Ornithobacterium rhinotracheale, Escherichia coli, Salmonella spp., Staphylococcus aureus, Streptococcus spp., Shigella spp., Klebsiella spp., Proteus spp., в т.ч. в отношении бактерий, которые производят ацетилтрансферазу и являются устойчивыми к хлорамфениколу.

При пероральном применении флорфеникол быстро всасывается из пищеварительного аппарата и поступает в системный кровоток, достигая максимальной концентрации в сыворотке крови свиней и птиц через 1-1.5 ч и сохраняется на терапевтическом уровне в течение 24 ч. Выделяются флорфеникол и его метаболиты из организма птиц с пометом, у яйценоской птицы - частично с яйцами.

Методика исследований.

Экспериментальную работу проводили в#nbsp;виварии ФГБОУ#nbsp;ВО Саратовский ГАУ. Для#nbsp;работы использовали цыплят-бройлеров с#nbsp;21-дневного возраста кросса КОББ-500.

По#nbsp;принципу аналогов было сформировано 4 группы, по#nbsp;12 голов в#nbsp;каждой, из#nbsp;них 3 опытных и#nbsp;1 контрольная. 2019

Для#nbsp;идентификации цыплят применяли бирки-кольца на#nbsp;правую лапку.

Препарат вводили групповым способом с#nbsp;водой в#nbsp;дозах, выбранных заказчиком согласно инструкции по#nbsp;применению:

1-я опытная группа (n = 12) до#nbsp;4-недельного возраста получала основной рацион, плюс задавали препарат флорфеникол групповым способом с#nbsp;водой для#nbsp;питья из#nbsp;расчета 100 мл#nbsp;на#nbsp;100 л#nbsp;воды в#nbsp;течение 10 дней, 1 раз в#nbsp;день, а#nbsp;также гуминовые кислоты в#nbsp;дозе 1,0 г/кг корма. В#nbsp;другие возрастные категории задавалось из#nbsp;расчета по#nbsp;200 мл#nbsp;препарата на#nbsp;100 л#nbsp;воды.

2-я опытная группа (n = 12) до#nbsp;4-недельного возраста получала основной рацион, плюс задавали препарат флорфеникол групповым способом с#nbsp;водой для#nbsp;питья из#nbsp;расчета 100 мл#nbsp;на#nbsp;100 л#nbsp;воды в#nbsp;течение 10 дней, 1 раз в#nbsp;день, а#nbsp;также гуминовые кислоты в#nbsp;дозе 1,5 г/кг корма. В#nbsp;другие возрастные категории задавалось из#nbsp;расчета по#nbsp;200 мл#nbsp;препарата на#nbsp;100 л#nbsp;воды.

3-я опытная группа (n = 12) до#nbsp;4-недельного возраста получала основной рацион, плюс задавали препарат флорфеникол групповым способом с#nbsp;водой для#nbsp;питья из#nbsp;расчета 100 мл#nbsp;на#nbsp;100 л#nbsp;воды в#nbsp;течение 10 дней, 1 раз в#nbsp;день, а#nbsp;также гуминовые кислоты в#nbsp;дозе 1,5 г/кг корма. В#nbsp;другие возрастные категории задавалось из#nbsp;расчета по#nbsp;200 мл#nbsp;препарата на#nbsp;100 л#nbsp;воды.

Контрольной группе (n = 12) применяли основной рацион, плюс антибиотик в#nbsp;дозе до#nbsp;4 недель 100 мл#nbsp;на#nbsp;100 л#nbsp;воды, а#nbsp;после 200 мл#nbsp;на#nbsp;100л воды 1 раз в#nbsp;день.

В#nbsp;процессе эксперимента, ежедневно, проводили общий осмотр и#nbsp;взвешивание птицы.

Отбор биологического материала осуществляли через 1, 10, 12, 15 и#nbsp;16 дней после начала эксперимента. Аспирацию крови с#nbsp;целью биохимических исследований осуществляли в#nbsp;вакуумные про- бирки для#nbsp;invitro диагностики «Improvacuter» (GuangzhouImproveMedicalInstrumentsCo. Ltd, China) с#nbsp;использованием тромбина в#nbsp;качестве активатора сгустка по#nbsp;2 мл.

Для#nbsp;гематологических исследований по#nbsp;0,1−0,2 мл#nbsp;— в#nbsp;микропробирки с#nbsp;антикоагулянтом К2 ЭДТА для#nbsp;капиллярной крови 200 мкл «ЮНИВЕТ» в#nbsp;модификации «ЮНИВЕТ-IIм» по#nbsp;ТУ 9398−033−59 879 815−2012. Взятие крови производили из#nbsp;подкрыльцовой вены. Предварительно по#nbsp;ходу вен удаляли перо, дезинфицировали кожу 70%-м раствором этилового спирта.

Для#nbsp;получения сыворотки пробы центрифугировали 10 мин при 3000 мин (-1).

Для#nbsp;отбора биологического материала проводили эвтаназию птицы. Убой птицы проводили с#nbsp;соблюдением правил, принятых Европейской Конвенцией по#nbsp;защите позвоночных животных, используемых для#nbsp;экспериментальных и#nbsp;иных научных целей. Персонал, участвующий в#nbsp;эксперименте, обучен правильному и#nbsp;гуманному обращению с#nbsp;лабораторными животными. При этом отбирали кусочки бедренных и#nbsp;грудных мышц, размером 1x1 см#nbsp;в#nbsp;равных объемах. Мышечную ткань упаковывали в#nbsp;контейнеры и#nbsp;хранили при#nbsp;— 20#nbsp;°C до#nbsp;проведения лабораторных исследований. Помимо этого, для#nbsp;гистологического исследования брали кусочки органов пищеварительного канала, которые фиксировали в#nbsp;10%-м нейтральном забуференном формалине.

Определение концентрации флорфеникола проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с#nbsp;использованием набора реагентов MaxSignal ® «BIOO Scientific Corporation» («BIOO»). На#nbsp;иммуноферментном анализаторе Multiskan Go#nbsp;для спектроскопии в#nbsp;видимой области для#nbsp;микропланшет.

Критерием оценки эффективности кормовой добавки Reasil Humic Health кислот являлась скорость элиминации антибиотика «Флорфеникол» после прекращения его введения птице, а#nbsp;также по#nbsp;сохранению терапевтической концентрации антибактериального препарата во#nbsp;время его применения совместно с#nbsp;кормовой добавки Reasil Humic Health на#nbsp;основе гуминовых кислот.

Статистическую обработку полученных результатов по#nbsp;динамике прироста массы тела, изменений гематологических и#nbsp;биохимических показателей сыворотки крови проводили по#nbsp;стандартным процедурам, с#nbsp;помощью приложения MicrosoftExcel 2016 (MicrosoftCorp. USA) и#nbsp;пакета статистического анализа данных StatPlus 2009 professional 5.8.4 for Windows (StatSoftInc., USA)., с#nbsp;использованием t-критерия Стьюдента для#nbsp;оценки достоверности различий между выборками для#nbsp;опытных и#nbsp;контрольной групп. По#nbsp;результатам вычисления среднеарифметического и#nbsp;стандартного отклонения для#nbsp;данной выборки определяли стандартную ошибку среднеарифметического и#nbsp;границы его доверительного интервала с#nbsp;учетом коэффициента Стьюдента t (n, p) при уровне значимости 95% (p = 0,05) и#nbsp;числе измерений n = 12.

Оценку достоверности различий между средними значениями в#nbsp;опытных и#nbsp;контрольных экспериментах проводили по#nbsp;величине p-value в#nbsp;варианте двух-выборочного непарного t-теста (two- sampleunpaired t-test) с#nbsp;неравными дисперсиями.

Различия показателей принимали достоверными при выполнении неравенства p0,05. Кроме того, в#nbsp;этих случаях контролировали также соблюдение неравенства t, t (n, p) при n = (df +1) (где df#nbsp;— число степеней свободы), p = 0,05, где t = |x1-x2| / (s12+s22)½, x1 и#nbsp;x2#nbsp;— среднеарифметические значения, s1 и#nbsp;s2#nbsp;— их#nbsp;стандартные ошибки для#nbsp;двух выборок экспериментальных данных.

Различия определяли при Р0,05 уровне значимости.

Цифровой материал представляется в#nbsp;единицах СИ, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения и#nbsp;стандартом СЭВ 1062−78.

Результаты исследований.

На протяжении всего эксперимента, при ежедневном осмотре всех групп птиц, клинических изменений в общем состоянии, двигательной активности, аппетите и потреблении воды не наблюдали.

Вся птица как опытных, так и контрольной групп, была активна. Реакция на внешние раздражители сохранена. Температура тела цыплят-бройлеров на всем протяжении опыта оставалась в пределах физиологических значений во всех группах птиц.

Влияние совместного перорального введения антибактериального препарата «Флорфеникол» и гуминовых кислот на эффективную концентрацию антибиотика в организме во время его применения и скорость элиминации после отмены последнего, оценивали по концентрации «Флорфеникола» в мышечной ткани. Результаты представлены в таблице и на рис. 1.

В результате проведенных исследований установлено, что на первые сутки эксперимента, непосредственно после введения антибиотика без применения кормовой добавки Reasil Humic Health, на основе гуминовых кислот, концентрация его в мышечной ткани составляла 1889,96±368,78 нг/г биологического материала (рис. 2). Данная концентрация является достаточной для проявления терапевтического эффекта в организме животного.

В дальнейшем цыплят разделили на группы по принципу аналогов.

Через 10 дней совместного применения антибактериального препарата и кормовой добавки Reasil Humic Health, во всех группах цыплят изменений концентрации антибактериального препарата в мышечной ткани не наблюдали. Таким образом, можно заключить, что при совместном применении антибиотика «Флорфеникол» и кормовой добавки Reasil Humic Health на основе гуминовых кислот цыплятам, последние не оказывают отрицательного влияния на эффективную терапевтическую концентрацию антибиотика в организме птицы (рис. 3). Достоверных отличий между группами птицы не отмечали.

Через двое суток после отмены антибактериального препарата (на#nbsp;12-е сутки эксперимента) отмечали достоверное снижение флорфеникола в#nbsp;мышечной ткани цыплят как опытных, так и#nbsp;контрольной группы соответственно до#nbsp;96,64±23,26; 46,26±12,6; 23,72±5,7 и#nbsp;27,43±6,6 нг/г мышечной ткани.

Вместе с#nbsp;этим, нельзя не#nbsp;отметить, что более интенсивную элиминацию антибиотика наблюдали из#nbsp;организма опытных групп цыплят. Так, в#nbsp;первой опытной группе, концентрация его была в#nbsp;2 раза меньше, чем в#nbsp;контроле, а#nbsp;в#nbsp;3-й и#nbsp;4-й группах#nbsp;— в#nbsp;4 и#nbsp;2 раза меньше, чем в#nbsp;первой. Содержание антибактериального препарата в#nbsp;мышечной ткани цыплят 3-й и#nbsp;4-й групп, достоверных отличий не#nbsp;имели.

Наряду с#nbsp;этим, учитывая тот факт, что в#nbsp;Российской Федерации и#nbsp;странах ЕАЭС максимально допустимые уровни флорфеникола в#nbsp;продуктах питания регламентируемые «Едиными санитарно- эпидемиологическим и#nbsp;гигиеническими требованиями к#nbsp;товарам, подлежащих санитарно- эпидемиологическому надзору (контролю)», в#nbsp;мясе: крупного и#nbsp;мелкого рогатого скота не#nbsp;должны превышать 0,2 мг/кг, свиньи#nbsp;— 0,3 мг/кг и#nbsp;в#nbsp;мясе птицы#nbsp;— 0,1 мг/кг, или 100 нг/г.

По#nbsp;результатам собственных исследований можно заключить, что в#nbsp;контрольной группе птицы, которой не#nbsp;применяли кормовую добавку Reasil Humic Health, на#nbsp;основе гуминовых кислот, концентрация антибиотика находилась на#nbsp;границе максимально допустимого его уровня. В#nbsp;то#nbsp;же время у#nbsp;цыплят опытных групп его содержание было в#nbsp;2 и#nbsp;4 раза меньше (рис. 4).

На 15-е и 16-е сутки эксперимента, как у подопытных, так и у интактных цыплят наблюдали следовые концентрации антибактериального препарата в мышечной ткани. Достоверных отличий между группами не отмечали (рис. 5, 6).

Во время дачи антибиотика, кормовая добавка Reasil Humic Health, находясь в организме птицы, не выводила антибиотик из организма, а следовательно, не препятствовала его работе. После прекращения дачи флорфеникола, антибиотик начинал выводиться через 2 дня. Следовательно, кормовая добавка Reasil Humic Health, на основе гуминовых кислот, ускоряла этот процесс в 4 раза при введении ее в дозе 1,5 г/кг корма. Дальнейшее повышение дозы кормовой добавки Reasil Humic Health, на основе гуминовых кислот, не приводило к ускорению элиминации антибиотика из мышечной ткани.

Заключение.

Результаты проведенных нами исследований показывают, что совместное применение антибиотика «Флорфеникол» и кормовой добавки Reasil Humic Health, на основе гуминовых кислот, не препятствует накоплению антибактериального препарата в мышечной ткани в терапевтических концентрациях.

Совместное применение антибиотика «Флорфеникол» и кормовой добавки Reasil Humic Health на основе гуминовых кислот в дозах 1, 1,5 и 2 г/кг корма способствует ускорению элиминации антибактериального препарата из организма птицы в 2 - 4 раза после отмены противомикробной терапии.

Наиболее эффективной дозой кормовой добавки Reasil Humic Health является - 1,5 г/кг корма. Дальнейшее увеличение дозы не приводит к ускорению элиминации антибиотика.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Беспалов#nbsp;А.#nbsp;П., Булавина#nbsp;Е.#nbsp;Л. / Антибиотики в#nbsp;птицеводстве#nbsp;— как отказываться? / // Организация системы контроля инфекционных болезней птиц, применения антимикробных препаратов и#nbsp;выпуска безопасной продукции птицеводства: коллективная монография. // СПб., 2018. —#nbsp;С. 250−276.

2. Фисинин#nbsp;В.#nbsp;И., Егоров#nbsp;И.#nbsp;А. / Питание птицы как основа поддержания иммунитета и#nbsp;профилактики инфекционных заболеваний // Организация системы контроля инфекционных болезней птиц, применения антимикробных препаратов и#nbsp;выпуска безопасной продукции птицеводства: коллективная монография. // СПб., 2018. —#nbsp;С. 84−107.

3. Щепеткина#nbsp;С.#nbsp;В. / Антибиотики в#nbsp;птицеводстве: запретить нельзя нормировать // Эффективное животноводство. —#nbsp;2019. —#nbsp;№ 4 (152). —#nbsp;С. 80−84

4. Щепеткина#nbsp;С.#nbsp;В., Ришко#nbsp;О.#nbsp;А. / Обзор антимикробных препаратов, применяемых в#nbsp;птицеводстве // Организация системы контроля инфекционных болезней птиц, применения антимикробных препаратов и#nbsp;выпуска безопасной продукции птицеводства: коллективная монография. // СПб., 2018. —#nbsp;С. 198−231.

Dmitriev N.O., Kozlov S.V., Salautin V.V., Vasiliev A.A.

Saratov State Agrarian University named after N.I. Vavilov

Keywords: antibacterial preparation, feed additive, humic acids, Reasil Humic Health, florfenicol, broiler chickens, method of solid-phase enzyme immunoassay.

The results of the research showed the effect of the Reasil Humic Health food additive based on humic acids on the rate of elimination of the antibacterial drug from the body of broiler chickens of the COBB 500 cross.

It was found that the food additive Reasil Humic Health accelerates the elimination process by 4 times when it is administered in a dose of 1.5 g/kg of feed, after the abolition of antimicrobial therapy. Further increase in the dose of the fооd additive does not accelerate the elimination of the antibiotic from the muscle tissue.